重磅！流式胞内染色进入“傻瓜时代”，助力巨噬细胞极化研究提速50%！
师妹
师兄救命！我又把CD206和IL-10染废了……明明按Protocol走的：先固定、再破膜、加抗体，结果阴性群都快和阳性肩并肩了！
传统方法坑太多吧？固定破膜分两步，中间洗几次，手抖就前功尽弃！更别说全血样本还得先溶血，细胞都碎一半了！
师兄
师妹
对啊！每次做胞内因子和磷酸化蛋白，就像在钢丝上跳舞…… 到底为啥非要固定破膜啊？直接染不行吗？
来，敲黑板👇
1. 固定：用甲醛类试剂把细胞‘冻住’，防止抗原流失，保持结构；
2. 破膜：用去垢剂在细胞膜上打孔，让抗体能钻进胞内抓靶点。没这步，你连细胞因子的门都摸不到！
师兄
师妹
那选试剂要注意啥？上次破膜后非特异染色高得离谱……
试剂决定生死！传统破膜剂比如皂苷、Triton X-100，容易过度破膜或残留，导致背景荧光炸裂、细胞形态塌陷、表面抗原被破坏！
试试这个Cell Fixation & Permeabilization Kit（TH1 TH2 TH17 适用胞浆指标检测）--ZYFB010-0010，《Advanced Materials》的动脉粥样硬化研究就用它！
师兄
1. 文献速递
⋄ 题目：Polypyridiniums with Inherent Autophagy-Inducing Activity for Atherosclerosis Treatment by Intracellularly Co-Delivering Two Antioxidant Enzymes
⋄ 期刊：ADVANCED MATERIALS
⋄ 影响因子：27.4
⋄ 单位及作者：华东师范大学程义云、华南理工大学王辉团队联合上海交通大学第一人民医院王长平团队。论文第一作者为华南理工大学博士研究生梁梦晓和上海交通大学第九人民医院王谦。
研究背景：
动脉粥样硬化 (AS) 是主要死因。其发展涉及两个关键病理过程：
a. 活性氧 (ROS) 过载：氧化 LDL，引发炎症，损伤内皮，促进斑块形成和不稳定。
b. 自噬缺陷：导致脂质清除障碍（泡沫细胞形成）、炎症失控、斑块不稳定。
c. 现有疗法局限：单一靶点效果有限；抗氧化酶（SOD, CAT）难以有效递送至病变细胞（如巨噬细胞）胞浆内发挥作用。
解决策略：
设计一种多功能聚合物载体，同时解决两个核心问题：
a. 高效共递送抗氧化酶 (SOD & CAT)：清除巨噬细胞内过量ROS。
b. 固有诱导自噬活性：促进脂质清除（抑制泡沫细胞形成）、抗炎、稳定斑块。
c. 靶向递送：利用中性粒细胞膜伪装纳米颗粒，靶向动脉粥样硬化炎症部位的巨噬细胞。
材料设计：
筛选聚吡啶鎓盐聚合物库 (PNx)：
a. 合成：通过不同链长烷基卤化物部分季铵化聚(4-乙烯基吡啶) (PVP)。
b. 筛选标准：高效胞浆蛋白递送能力（以 eGFP 为模型蛋白）。
c. 优选材料：P5c（戊基链，高季铵化度 ≈71%）。优势：高蛋白结合力（离子、氢键、疏水、阳离子-π相互作用）、高血清稳定性、强内涵体逃逸能力（通过内吞和膜穿孔双途径进入细胞）。
体外功能验证 (巨噬细胞 RAW264.7)：
a. 高效递送 SOD & CAT：P5c成功将两种酶递送至巨噬细胞胞浆。
b. 有效清除 ROS： P5c/SOD/CAT 复合物显著降低 LPS 诱导的细胞内ROS水平。
c.诱导巨噬细胞M2型极化 (抗炎)：P5c/SOD/CAT处理显著降低促炎M1型巨噬细胞比例 (iNOS+ CD206-)，增加抗炎M2型巨噬细胞比例 (iNOS- CD206+)，并降低炎性因子TNF-α和IL-6分泌。
d. 固有诱导自噬： P5c 本身能有效诱导巨噬细胞自噬（mCherry-GFP-LC3 试验显示自噬流畅通）。
e. 抑制泡沫细胞形成：P5c以及P5c/SOD/CAT通过诱导自噬（增加LC3-II/I比值，降低p62水平），显著减少oxLDL诱导的巨噬细胞脂质积累（油红O染色）。
体内治疗 (ApoE⁻/⁻小鼠模型)：
a. 靶向修饰：将 P5c/SOD/CAT 纳米颗粒包裹中性粒细胞膜 (NeuM@P5c/S/C)，赋予炎症靶向性，并提高在动脉病变区域的积累。
b. 显著疗效：
① 大幅减少主动脉斑块面积（油红O染色）。
② 减小斑块坏死核心，增加胶原含量和纤维帽厚度，降低MMP-9表达，显著稳定斑块。
③ 降低斑块内促炎M1型巨噬细胞标志物iNOS表达，减少氧化应激和衰老细胞标志物γ-H2AX。
④ 激活斑块内自噬（增加LC3，降低p62）。
⑤ 部分恢复脾小体结构（表明系统性抗炎/抗氧化效果）。
结论：
本研究开发的聚吡啶类纳米材料通过激活巨噬细胞的自噬和抑制ROS产生，成功减缓了动脉粥样硬化的进展。该策略展示了多靶点调控在动脉粥样硬化治疗中的潜力，具有广泛的临床应用前景。
2. 引用产品及关键步骤
👉 Cell Fixation & Permeabilization Kit（TH1 TH2 TH17 适用胞浆指标检测）--FMS-FP0050（现已更新为ZYFB010-0010）
1）关键步骤： 在利用流式细胞术区分和定量巨噬细胞M1（iNOS）和M2（CD206）亚群时，需要进行细胞内染色--固定 (Fixation)和透化 (Permeabilization)处理。
a. 固定： 稳定细胞结构，防止抗原流失。
b. 透化： 在细胞膜上制造微孔，允许抗体进入细胞内部结合胞内抗原 (如 iNOS)。
2）结果：P5c/SOD/CAT 纳米复合物能够显著地将巨噬细胞从促炎的 M1 型极化为抗炎的 M2 型。
3）遵研提供标准化的细胞固定和膜透化方案，使得研究人员能够利用流式细胞术的同时准确地检测CD206和iNOS，从而精确量化巨噬细胞M1和M2亚群的比例变化。没有这种有效的胞内染色技术，就无法获得证明 P5c/SOD/CAT 纳米颗粒具有强大免疫调节（促进M2极化）能力的关键数据。因此，ZYFB010-0010是该部分实验成功进行并得出可靠结论的基础工具。
3. 引用产品介绍
明星产品：ZYFB010-0010/20
温和而高效的固定破膜液
产品优势：
双组分免溶血设计： 包含固定液（A液）和破膜/溶血液（B液），直接处理全血样本，无需额外溶血步骤。
操作极简高效： 破膜步骤简便快速，破膜剂（B液）可与检测抗体同时加入样本（一步法），显著缩短流程。
染色质量优异： 破膜后细胞非特异性背景低，信号清晰，能精准区分阴/阳性细胞群（信噪比高）。
兼容胞内胞表双标： 支持同步检测细胞表面和细胞内抗原。
Note： 必须先标记细胞表面抗原，再进行固定/破膜，最后标记细胞内抗原。
三大绝杀：
1️⃣ 免溶血破膜二合一
2️⃣ 破膜抗体一步走
3️⃣ 信号干净如手术刀
看文章数据-- iNOS和CD206双标，M1/M2群分得比楚河汉界还清楚！
师妹
这非特异性背景低到离谱！怎么做到的？
独家温和破膜配方：
1. 保持表面抗原完整性：先染表位再固定，零损伤；
2. 精准打孔：只开足够抗体进出的通道，不‘拆家’；
3. 去游离荧光基团：本底信号直接压到地心。
师兄
师妹
操作顺序呢？听说胞内胞表双标容易翻车……
记住这个黄金顺序口诀：① 表抗进（染CD3/CD4等）→ ② 固定（加 A液）→ ③ 破膜、内抗冲（B液中染TNF-α/IL-6等）按这个来，稳如泰山！
师兄
4. 遵研流式相关产品推荐
遵研流式相关产品货号：
赛尔普生物同时提供流式检测服务：
1） “一对一”为您定制方案，专业的技术咨询和指导
2）样本制备→处理→染色→数据分析，一站式服务体验
3）每支抗体精心挑选，确保最好的流式结果
👇常见panel、送样即测
联系我们
如果您有任何实验/产品服务咨询，都可以添加右侧微信联系我们哦~
